Alessandra Mussolini urodziła się w 1962 roku. Ukończyła z wyróżnieniem medycynę i chirurgię na Uniwersytecie Rzymskim. Jest członkiem Kolegium Lekarzy i Chirurgów w Rzymie. Po raz pierwszy została wybrana do Izby Deputowanych włoskiego parlamentu w 1992 roku, a następnie ponownie w 1994, 1996 i 2001 roku. W 2008 r. została ponownie wybrana do włoskiej Izby Deputowanych, gdzie pełniła funkcję przewodniczącej Komisji ds. Dzieciństwa i Młodzieży. W 2013 r. została wybrana do Senatu Republiki Włoskiej i na stanowisko Sekretarza Prezydencji Rady. Podczas swojej kariery politycznej była dwukrotnie wybierana na radną Neapolu, radną prowincji Latina i radną regionu Kampanii. Posłanka do Parlamentu Europejskiego w latach 2004-2008, 2014-2019 i od 2022 roku.